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Inmunohistoquímica

Inmunohistoquímica, técnica, utilidad y aplicaciones en oncología.

Inmunohistoquímica

IHC por sus siglas en inglés, es una técnica histopatológica en la que se usan anticuerpos para detectar la presencia de una sustancia específica (antígeno) que se quiere identificar en una célula tejido.

La técnica se basa en el complejo antígeno-anticuerpo, estos últimos por lo general se encuentran unidos a una enzima o un cromógeno (casi siempre fluorescente), que se activan cuando ocurre la unión entre el antígeno y el anticuerpo en la muestra de tejido, de esta manera, la presencia del antígeno se podrá observar en el microscopio.

Los resultados de la prueba se basan en la capacidad de las células teñidas o el porcentaje de células teñidas. 

La IHC es comúnmente utilizada porque no es cara, no requiere equipos especiales y generalmente es precisa.


Existen 2 tipos de métodos Inmunohistoquímicos. 

Método directo: El anticuerpo específico contra la sustancia que se quiere detectar está marcado con partículas detectables en el microscopio. 

Método indirecto: La señal del anticuerpo primaria se amplía utilizando sucesivas capas de anticuerpos o marcadores.

Protocolo Inmunohistoquímico estándar

1. Obtención de corte histológico. 

2. Recuperación de antígenos en calor con buffer citrato e inhibición de peroxidasas endógena (no necesario en técnicas de inmunofluorescencia).

3. Incubación con anticuerpo primario (los anticuerpos siempre se diluirán en la solución PBST-BSA).
Incubación con anticuerpo primario

4. Lavado con buffer (PBST**). Esto eliminará los anticuerpos que no se han unido.

5. Incubación con anticuerpo secundario (puede estar biotinilado****, unido a peroxidasa o a un cromógeno).

Incubación con anticuerpo secundario



6. Lavado con buffer (PBST). Esto eliminará los anticuerpos que no se han unido.

7. Incubación con estreptavidina peroxidasa.
Incubación con estreptavidina peroxidasa


8. Lavado con buffer (PBST). Esto eliminará la 
estreptavidina peroxidasa que no se ha unido.

9. Incubación con cromógeno (pardo diaminobenzidina).

Incubación con cromógeno

10. Lavado con buffer (PBST) y técnica histología HE para teñir fondo.

11. Observar en el microscopio.
Corte inhumohiqtoquimica


*BAS: Bovine serum albumin o suero de albumina bovina.
**PBST: Phosphate Buffered Saline with Tween 20 (o Triton X-100) o tampón fosfato salino con triton.
***Biotinilado: Molécula marcada con biotina, esto es moléculas a las cuales se les ha unido covalentemente biotina como marcaje para ser detectada en ensayos. La Biotina también se conoce como vitamina H, vitamina b7 y vitamina v8.


Carcinoma ductal infiltrante (Her-2) Lesión intraepitelial escamosa de alto grado (HSIL) Leiomiosarcoma uterino (Desmina, IHQ) Melan-A-01 Luteoma of Pregnancy (inhibin immunostain) Explant



Utilidad de la Inmunohistoquímica.

Diagnóstico.
• Estirpe de la neoplasia
• Origen de metástasis de primario desconocido
• Subtipo preciso
• Caracterización de productos de secreción
• Determinación de naturaleza benigna versus maligna de una proliferación celular
• Identificación de agentes infecciosos

Pronóstico y valor predictivo.
• Receptores hormonales
• Expresión de oncogenes
• Indice proliferativo
• Angiogénesis
• Blancos específicos para inmunoterapia




Inmunohistoquímica en oncología

En oncología, hoy en día se utiliza para la definir el tipo de tumor maligno y para la valoración de la mayor parte de los factores de pronósticos en tumores malignos.

Factor pronóstico: predice evolución.
- Supervivencia libre de enfermedad
- Supervivencia global

Factor predictivo: indica respuesta a tratamiento específico.

Evolución del cáncer:
- Características intrínsecas de células neoplásicas
- Extensión (estadio clínico)
- Estado del paciente




Fuentes:

Información obtenida en el aula a través de la profesora de la cátedra de Citología, Marian Nadales. Laboratorio Clínico Marian Nadales T.
Inmunohistoquímica - Wikipedia.
Estudio Inmunohistoquímico – Red Clínica.
Inmunohistoquímica – Diccionario del cáncer.
Inmunohistoquímica – Cáncer Quest.
Técnica Inmunohistoquímica – USAL.

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